20世纪30年代（1935年）在德国发明并生产了第一批电子显微镜以来，应用日渐广泛，使组织学的研究上了一个新的台阶，开避了新纪元，从一般显微结构领域迈入了亚显微结构水平。
（一）透射电镜（transmission electron microscope，TEM）：是最广泛使用的一类电镜。它的特点是电子束必须穿透样品，因此观察的样品必须很薄，约为50nm左右。可观察细胞和组织的超薄切片，复型膜，负染样品等。
（二）扫描电镜（scanning electron microscope，SEM）：主要特点是观察物体表面的立体微细结构。其在医学上主要用于观察组织或细胞的表面或断面结构，扫描图像具有立体感，样品制备较简单，因此在医学上应用日渐增多。
1．原则：
快、准、轻、小、冷；1mm3
2．注意事项：
（1）防止组织挤压和过度伸展；
（2）使用锋利的刀，尽量减少对组织的机械性损伤；
（3）取材最好在冰块上，或同时放在固定液内操作；
（4）培养细胞的收集时，要将培养液离心后，取沉淀物漂洗固定。
1．常用固定操作的方法
（1）戊二醛-锇酸双重固定法
前固定：2%戊二醛
后固定：1%锇酸
（2）培养细胞固定法
培养细胞需要固定时，先弃去培养液，加入戊二醛固定液，在冰溶或4℃的温度下放置5~10分钟，再用刮板将细胞刮下，倒入离心管中离心弃上清，沿管壁缓缓加入预冷的戊二醛固定液15~30分钟，再吸去上清，经缓冲液清洗15分钟后，继用1%锇酸对样品作后固定30分钟。
2．注意事项
（1）理想的固定剂应能迅速而均匀地渗入组织细胞内部，稳定细胞内各种成分；能即刻将细胞杀死尽可能保持细胞微细结构，减少死后变化；对细胞产生收缩及膨胀作用，不产生人工假象及变形。
（2）固定液的酸碱度必须与被固定组织的酸碱度基本一致，大多数动物组织酸碱度的平均值是7.4。
（3）缓冲液的选择要根据实验不同要求加以选择；磷酸盐缓冲液可以有效地控制固定液的酸碱度，并能促进样与铅盐、铀盐之间的反应，是动物组织的有效缓冲系统，但缺点是可抑制细胞内某些酶（如6磷酸葡萄糖脱氢酶）的反应。
（4）戊二醛固定后必须充分浸洗，才能转入锇酸固定。
（5）戊二醛固定液一般用磷酸缓冲液或二甲砷酸钠缓冲液配制，不能用醋酸—巴比妥缓冲液，因此缓冲液可使戊二醛的醛基失效。
1．脱水过程
脱水剂：乙醇或丙酮
彻底清洗样品
50%乙醇或丙酮 10~15分钟
70%乙醇或丙酮 10~15分钟
80%乙醇或丙酮 10~15分钟
90%乙醇或丙酮 10~15分钟
100%乙醇或丙酮 10~15分钟
100%乙醇或丙酮 30分钟
2．注意事项：
（1）脱水要彻底；
（2）如果当天完不成浸透、包埋操作时，应将样品停留在4℃70%乙醇或丙酮中过夜。
（3）脱水操作动作尽量要快，特别是100%脱水剂，更要注意样品块不要在空气中停留时间过长，否则会造成样品干燥。
1．浸透包埋剂：Epon812环氧树脂包埋剂
A液：Epon812 10ml
DDSA十二烷基琥珀酸酐 16ml
B液：Epon812 10ml
MNA六甲酸酐 8.9ml
A液和B液按比例混合，B液比例越大，包埋块越硬（冬天1：4；夏天1：9），待上述二液混匀后再按1.5~2%的体积比，在充分搅拌中滴加DNP-30
2．过程
（1）脱水后的样品入丙酮、环氧丙烷等量混合液15min
（2）环氧丙烷Ⅰ15min
（3）环氧丙烷Ⅱ15min
（4）环氧丙烷、包埋剂等量混合液数小时
（5）纯包埋剂数小时
3．包埋
（1）定向包埋
（2）烘干包埋板
（3）37ºC ~45ºC恒温箱中24小时
（4）60ºC恒温箱24小时
（5）72ºC恒温箱24小时
4．注意事项
（1）浸透、包埋用注射器、吸管、烧杯、胶囊、牙签及其它器皿，均应在用前烘干，有能有任何水分。
（2）所用的药品均应注意防潮，药品应在干燥器中存放或在冰箱里保存。
（3）包埋时动作要轻巧，避免产生气泡影响切片。
（4）操作时皮肤勿接触包埋剂，以防引起皮炎。
（5）制好的包埋块应放于带盖的小瓶里，存放在干燥器中，以防止包埋块吸潮变软影响切片。
包埋块的修整
切片刀的制备：玻璃刀，钻石刀
定位
选择与清洗载网
制备支持膜
切片
捞片
1．电子染色剂
（1）醋酸铀：浓度为饱和液
醋酸铀 2g
50~70%乙醇 100ml
PH4.2
（2）铅盐类
硝酸铅 Pb(NO3)2 1.33g
柠檬酸钠Na(C6H5O7)·2H2O 1.76g
蒸馏水 30ml
将上试剂放入50ml容量瓶内，用力振荡30分钟，发生化学反应，结合为柠檬酸铅，溶液呈现为乳白色的柠檬酸铅混悬液，然后加入1N氢氧化钠8ml，使柠檬酸铅溶解，变成无色透明状，最后再加蒸馏水至50ml，PH为12
2．过程：
（1）醋酸铀滴注染色 30分钟
（2）清洗 3次
（3）柠檬酸铅滴注染色 30分钟
（4）自然干燥即可电镜观察
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